一、研究背景

天然殺傷T細胞（NKT）是T淋巴細胞的(de)一個(gè)獨特的(de)子集，它通(tōng)過細胞因子的(de)快(kuài)速釋放和(hé)與免疫系統其它細胞直接作用(yòng)來(lái)調節免疫反應。因此NKT細胞作爲先天和(hé)适應性免疫系統之間的(de)重要聯系，是免疫療法的(de)有前景的(de)靶點。I型NKT細胞，也(yě)稱iNKT細胞，是小鼠中最常見的(de)NKT細胞，在人(rén)類中具有相似的(de)特性。

TRAJ18基因與TRAv11基因結合，形成具有适當抗原特異性的(de)iNKT細胞受體（Tcr）。有報道指出敲除TRAJ18基因的(de)小鼠，約60%的(de)TCRα多(duō)樣性缺乏。

       參考文獻：

1.    Lower TCR repertoire diversity in Traj18-deficient mice.

2.    Generation of Novel Traj18-Deficient Mice Lacking Vα14 Natural Killer T Cells with an Undisturbed T Cell Receptor α-Chain Repertoire.

3.    Mutation of the Traj18 gene segment using TALENs to generate Natural Killer T cell deficient mice.

二、制備方法

背景小鼠：C57BL/6J

構建信息：應用(yòng)CRISPR/Cas介導的(de)基因組工程技術建立 Traj18基因敲除小鼠模型；小鼠Traj18基因(Gene ID: 100124371)位于小鼠14号染色體上，小鼠的(de)Traj18基因爲目的(de)位點：

将構建兩對(duì)gRNA靶向載體，并經測序證實。體外轉錄産生的(de)Cas9mRNA和(hé)gRNA将被共同注射到受精卵中，以促進KO小鼠的(de)産生。用(yòng)PCR進行仔鼠基因分(fēn)型，然後進行序列分(fēn)析；将Traj18基因的(de)gRNA和(hé)Cas9mRNA共注射到受精卵中，以産生有針對(duì)性的(de)敲除後代。通(tōng)過PCR鑒定F0代首建鼠，随後進行序列分(fēn)析，然後與野生型小鼠繁殖獲得(de)F1代，再進行鑒定，F1代再進行繁殖，最終獲得(de)純合子小鼠。

三、評價與驗證

通(tōng)過流式細胞儀對(duì)敲除小鼠的(de)胸腺、脾髒和(hé)肝髒的(de)NKT細胞進行了(le)分(fēn)析，包括B220、CD3ξ，CD4，CD8α，TCRβ，相關的(de)标記購(gòu)買自BD公司。爲驗證該基因對(duì)腫瘤的(de)抵抗作用(yòng)，選取肝髒轉移的(de)B16黑(hēi)色素瘤，對(duì)小鼠進行靜脈注射，同時(shí)選擇αGalCer-DC細胞注射作爲另一實驗組。接種腫瘤實驗表明(míng)，該敲除小鼠對(duì)腫瘤的(de)耐受能力下(xià)降。

四、討(tǎo)論和(hé)結論

該品系可(kě)用(yòng)于NKT細胞相關的(de)多(duō)種疾病及發育相關研究。