一、研究背景

一、疾病概況

過敏性紫癜（allegric puprura，AP），又稱亨-舒綜合症（Henoch-Schönlein purpura，HSP），是一種常見的(de)血管變态反應性出血性疾病，以廣泛的(de)小血管炎爲病理(lǐ)基礎，皮膚紫癜、消化(huà)道粘膜出血、關節腫脹和(hé)腎炎等症狀爲其主要臨床特征，是兒(ér)童中發病率最高(gāo)的(de)血管炎性病。流行病學研究提示，HSP的(de)發病率爲（10~22）/10萬，好發年齡爲3~10歲，并發症多(duō)，過敏性紫癜性腎炎（Henoch-Schönlein purpura nephritis，HSPN）是最嚴重的(de)并發症。該病複發率高(gāo)，病程遷延，患病率逐年升高(gāo)，現代醫學對(duì)其治療無滿意效果。

目前關于HSP的(de)不少研究仍處在低水(shuǐ)平階段，鑒于直接進行人(rén)體實驗的(de)局限性，在很大(dà)程度上需要通(tōng)過動物(wù)實驗進行，所以HSP動物(wù)模型在整個(gè)HSP的(de)研究中具有舉足輕重的(de)作用(yòng)。目前，關于過敏性紫癜動物(wù)模型構建的(de)報道很少，因此對(duì)該病病因、發病機制、臨床治療評價和(hé)藥物(wù)開發在一定程度上受到限制。

二、發病機制

病因不明(míng)确，一般認爲與過敏有關，緻敏原可(kě)能爲食物(wù)、感染、藥物(wù)、花粉或昆蟲叮咬等，臨床上常不确定。緻敏原進入機體刺激漿細胞，産生抗體，與抗原結合形成免疫複合物(wù),主要是IgA免疫複合物(wù)，過多(duō)的(de)免疫複合物(wù)不易被巨噬細胞清除，刺激5-羟色胺、組胺等血管活性物(wù)質釋放，血管壁通(tōng)透性增加，組織水(shuǐ)腫。免疫複合物(wù)在血管壁或腎小球膜上沉積，産生過敏毒素，使中性粒細胞在沉積處聚集，并釋放蛋白水(shuǐ)解酶，局部組織血管損傷加劇，沉積在胃腸黏膜小血管，引起胃腸道出血。該發病機制類似于可(kě)溶性免疫複合物(wù)引起的(de)III型超敏反應。然而在相同條件下(xià)，很多(duō)人(rén)接受相同抗原刺激後，并未發生過敏性紫癜，而有些人(rén)則首次接觸這(zhè)些抗原刺激即可(kě)發生緻敏反應，說明(míng)患過敏性紫癜的(de)人(rén)需具備特異反應體質，并且研究發現這(zhè)種特異反應體質具有家族傾向性，即基因易感性。

二、制備方法

1．實驗動物(wù)

SD大(dà)鼠，4周齡，體重75~95g，22隻，雌雄各半，SPF級動物(wù)房(fáng)飼養。

2．模型構建

1）過敏體質的(de)構建

中醫熱(rè)性藥物(wù)幹姜、荜茇、胡椒水(shuǐ)煎劑以1:1:1的(de)比例混合成15%的(de)水(shuǐ)溶液，4℃保存備用(yòng)。動物(wù)适應1周後，模型組口服給藥，1次/日，連續3周，對(duì)照(zhào)組給以等量生理(lǐ)鹽水(shuǐ)，其它條件相同。

2）抗原緻敏

模型動物(wù)腹腔注射卵白蛋白生理(lǐ)鹽水(shuǐ)與弗氏完全佐劑以1:1比例混合的(de)乳化(huà)溶液0.5mL，1次/周，連續3 周。對(duì)照(zhào)組腹腔注射等量的(de)生理(lǐ)鹽水(shuǐ)。

3）抗原激發過敏反應

腹腔注射緻敏3周後，動物(wù)尾靜脈和(hé)皮内分(fēn)别注射1%和(hé)0.3%卵白蛋白生理(lǐ)鹽水(shuǐ)，激發過敏反應。之後觀察動物(wù)皮膚紅腫狀況，照(zhào)相存檔。

三、評價與驗證

非血小闆減少性皮膚紫癜症狀、血尿便常規、組織病理(lǐ)改變（包括炎症反應炎細胞浸潤、IgA免疫複合物(wù)沉積等）、血免疫指标（血清IgA及相關免疫細胞及細胞因子）等。

四、討(tǎo)論和(hé)結論

（一）模型的(de)皮膚特征：

在抗原激發後，24小時(shí)内均出現不同程度的(de)出血斑點，大(dà)鼠的(de)出血斑點呈彌散分(fēn)布，直徑1mm大(dà)小，周圍無紅腫滲出，出現症狀的(de)比例大(dà)約爲40%。

（二）模型病理(lǐ)特點：

模型大(dà)鼠病理(lǐ)表現爲皮下(xià)出血，真皮水(shuǐ)腫，血管擴張充血、出血，炎細胞浸潤；腎淤血，腎小球囊腔蛋白滲出物(wù)，血管擴張充血及局竈性炎症，腎小球系膜基質增多(duō)，系膜增厚，腎小管内蛋白管型等；胃黏膜可(kě)見出血，壞死脫落；小腸絨毛血管擴張充血，上皮細胞脫落；肺淤血，血管周圍水(shuǐ)腫；肝淤血，竈性炎細胞浸潤等。

免疫熒光(guāng)檢測發現IgA免疫複合物(wù)在模型組腎小球系膜區(qū)，血管壁及腎小球入球小動脈壁，常呈斑點狀、團塊狀、分(fēn)支狀或短線狀分(fēn)布。

腎髒PAS染色顯示模型組大(dà)鼠的(de)腎髒腎小球系膜增生，系膜基質增厚，囊腔蛋白滲出。

（三）血常規及便潛血檢測：

急性期血常規WBC升高(gāo)，LYMPH減少，Gran升高(gāo)（p<0.05），LYMPH%減少，Gran%升高(gāo)（p<0.01），PLT無明(míng)顯改變。實驗前便潛血檢測陰性，激發實驗後10%便潛血陽性。

長(cháng)春中醫藥大(dà)學4～12歲，住院 2～5天的(de)12名患者血常規檢測白細胞（WBC），粒細胞（Gran），單核細胞（MONO）及百分(fēn)比MONO% 明(míng)顯增加，分(fēn)别超出正常範圍的(de)百分(fēn)比爲33.3% (4/12)，25% (3/12)，41.6% (5/12)，33.3% (4/12)。淋巴細胞百分(fēn)比（LYMPH%）明(míng)顯減少，低于正常參考範圍的(de)比例爲25% (3/12)，血小闆未見明(míng)顯異常改變

（四）模型免疫指标改變：

血清IgA升高(gāo)（p<0.05），IgG升高(gāo)（p<0.01），C3，C4減少（p<0.05），IgE無明(míng)顯改變（圖6）。外周血CD4%下(xià)降，CD8%升高(gāo)（p<0.05），CD4/CD8比值下(xià)降，IL-4、TNF-α水(shuǐ)平升高(gāo)，差别均具有統計學意義，但IL-2水(shuǐ)平無差異。

長(cháng)春中醫藥大(dà)學4～12歲，住院 2～5天的(de)12名患者血清IgA， IgE升高(gāo)（p<0.01），IgG升高(gāo)（p<0.05），C3，C4減少（p<0.05）。血CD4+T細胞百分(fēn)比下(xià)降，CD4/CD8比值下(xià)降，IL-4、TNF-α水(shuǐ)平升高(gāo)，差别均具有統計學差異。

五、鑒定和(hé)評價的(de)其他(tā)材料

1.  李彥紅，黃(huáng)瀾，朱華，徐豔峰，隋小龍，徐玉環，韓雲林(lín)，馮曉純，秦川*.血液免疫學指标在過敏性紫癜大(dà)鼠和(hé)兔模型及患兒(ér)體内的(de)比較，中國比較醫學雜(zá)志，2014,24(1)：62-67.

2.   Yanhong Li, Xiaochun Feng, Lan Huang, Hua Zhu, Yanfeng Xu, Xiaolong Sui, Yuhuan Xu, Yunlin Han, Chuan Qin*. Hematologic and immunological characteristics of Henoch-Scho¨nlein purpura in rat and rabbit models induced with ovalbumin based on type III hypersensitivity, Scientific Reports，2015，5(8862)：1-6.