一、研究背景

一、疾病概況

過敏性紫癜（allegric puprura，AP），又稱亨-舒綜合症（Henoch-Schönlein purpura，HSP），是一種常見的(de)血管變态反應性出血性疾病，以廣泛的(de)小血管炎爲病理(lǐ)基礎，皮膚紫癜、消化(huà)道粘膜出血、關節腫脹和(hé)腎炎等症狀爲其主要臨床特征，是兒(ér)童中發病率最高(gāo)的(de)血管炎性病。流行病學研究提示，HSP的(de)發病率爲（10~22）/10萬，好發年齡爲3~10歲，并發症多(duō)，過敏性紫癜性腎炎（Henoch-Schönlein purpura nephritis，HSPN）是最嚴重的(de)并發症。該病複發率高(gāo)，病程遷延，患病率逐年升高(gāo)，現代醫學對(duì)其治療無滿意效果。

鑒于直接進行人(rén)體實驗的(de)局限性，在很大(dà)程度上需要通(tōng)過動物(wù)實驗進行，所以HSP動物(wù)模型在整個(gè)HSP的(de)研究中具有舉足輕重的(de)作用(yòng)。目前，關于過敏性紫癜動物(wù)模型構建的(de)報道很少，因此對(duì)該病病因、發病機制、臨床治療評價和(hé)藥物(wù)開發在一定程度上受到限制。

二、發病機制

病因不明(míng)确，一般認爲與過敏有關，緻敏原可(kě)能爲食物(wù)、感染、藥物(wù)、花粉或昆蟲叮咬等，臨床上常不确定。緻敏原進入機體刺激漿細胞，産生抗體，與抗原結合形成免疫複合物(wù)，主要是IgA免疫複合物(wù)，過多(duō)的(de)免疫複合物(wù)不易被巨噬細胞清除，刺激5-羟色胺、組胺等血管活性物(wù)質釋放，血管壁通(tōng)透性增加，組織水(shuǐ)腫。免疫複合物(wù)在血管壁或腎小球膜上沉積，産生過敏毒素，使中性粒細胞在沉積處聚集，并釋放蛋白水(shuǐ)解酶，局部組織血管損傷加劇，沉積在胃腸黏膜小血管，引起胃腸道出血。該發病機制類似于可(kě)溶性免疫複合物(wù)引起的(de)III型超敏反應。然而在相同條件下(xià)，很多(duō)人(rén)接受相同抗原刺激後，并未發生過敏性紫癜，而有些人(rén)則首次接觸這(zhè)些抗原刺激即可(kě)發生緻敏反應，說明(míng)患過敏性紫癜的(de)人(rén)需具備特異反應體質，并且研究發現這(zhè)種特異反應體質具有家族傾向性，即基因易感性。

二、制備方法

1．實驗動物(wù)

1.5月(yuè)齡日本大(dà)耳白兔24隻，12隻雌雄各半爲模型組，12隻雌雄各半爲對(duì)照(zhào)組，體重1.2～1.4kg，普通(tōng)級動物(wù)房(fáng)飼養。

2.模型構建

1）過敏體質的(de)構建

中醫熱(rè)性藥物(wù)幹姜、荜茇、胡椒水(shuǐ)煎劑以1:1:1的(de)比例混合成15%的(de)水(shuǐ)溶液，4℃保存備用(yòng)。動物(wù)适應1周後，模型組口服給藥，1次/日，連續3周，對(duì)照(zhào)組給以等量生理(lǐ)鹽水(shuǐ)，其它條件相同。

2）抗原緻敏

腹腔注射卵白蛋白生理(lǐ)鹽水(shuǐ)與弗氏完全佐劑以1:1比例混合的(de)乳化(huà)溶液1 mL，1次/周，連續3 周。對(duì)照(zhào)組腹腔注射等量的(de)生理(lǐ)鹽水(shuǐ)。

3）抗原激發過敏反應

腹腔注射緻敏3周後，動物(wù)耳緣靜脈和(hé)皮内分(fēn)别注射1%和(hé)0.3%卵白蛋白生理(lǐ)鹽水(shuǐ)，激發過敏反應。之後觀察動物(wù)皮膚紅腫狀況，照(zhào)相存檔。

四、模型主要鑒定方式

非血小闆減少性皮膚紫癜症狀、血尿常規和(hé)便潛血、病理(lǐ)改變（包括炎症反應炎細胞浸潤、IgA免疫複合物(wù)沉積等）、血免疫指标（血清IgA及相關免疫細胞及細胞因子）等。

三、評價與驗證

  1. 模型的(de)皮膚特征

兔耳緣靜脈及皮内注射卵白蛋白生理(lǐ)鹽水(shuǐ)溶液後，皮膚注射部位均會出現直徑1 cm左右的(de)皮丘，6 h後模型組兔的(de)背部皮丘逐漸變大(dà)，且周圍水(shuǐ)腫，皮内血液滲出；至18h左右，呈現片狀紫斑，直徑2-10mm，形狀不規則，大(dà)小不等，還(hái)有一些斑點出現在耳朵和(hé)腿部。在激發第8天左右，皮膚紫癜開始變小，滲出減少，20天左右，症狀明(míng)顯改善。皮膚症狀出現的(de)比例約爲85%。

2. 模型病理(lǐ)特征

（1）髒器組織形态學改變

模型動物(wù)病理(lǐ)表現爲皮下(xià)出血，真皮水(shuǐ)腫，血管擴張充血、出血，炎細胞浸潤；腎小球囊腔蛋白滲出物(wù)，血管擴張充血及局竈性慢(màn)性腎炎，腎小球系膜基質增多(duō)，系膜增厚，紅細胞管型，炎細胞浸潤等；還(hái)可(kě)見到關節腔滑膜淤血，結締組織壞死，炎細胞浸潤等；胃黏膜可(kě)見出血，壞死脫落；小腸絨毛血管擴張充血，上皮細胞脫落；肺淤血，肥大(dà)細胞似有脫顆粒現象；肝竈性炎細胞浸潤等等。

（2）皮膚、腎髒免疫複合物(wù)沉積

免疫熒光(guāng)檢測發現IgA免疫複合物(wù)在模型組兔皮膚主要沉積在皮膚真皮層血管壁、腎小球系膜區(qū)，血管壁及腎小球入球小動脈壁，常呈斑點狀、團塊狀、分(fēn)支狀或短線狀分(fēn)布。

（3）腎小球纖維增生性改變

腎髒Masson染色結果顯示模型組動物(wù)（a）腎小球系膜纖維化(huà)增生，膠原纖維蛋白增多(duō)，使得(de)系膜增厚，基質增多(duō)，與（c）圖PAS染色結果模型組兔腎小球系膜增生，系膜基質增厚相一緻。

（4）皮膚和(hé)肺髒的(de)嗜酸性細胞浸潤

嗜酸性粒細胞的(de)皮膚和(hé)肺髒Luna染色，表現爲單位面積（1mm²  ×40倍）視野内模型組兔皮膚真皮層和(hé)肺間質内嗜酸性粒細胞明(míng)顯增多(duō)

（三）血尿常規及便潛血改變

血白細胞WBC升高(gāo)，RBC相對(duì)于減少，PLT數量激發後無差異性改變，NEU、NEU%均升高(gāo)，EOS、EOS%升高(gāo)。尿液變稠表面觀察有拉絲現象，氣味大(dà)，67%尿蛋白陽性，尿紅細胞陽性；實驗前便潛血檢測陰性，激發實驗後70%便潛血陽性。

     長(cháng)春中醫藥大(dà)學4～12歲，住院 2～5天的(de)12名患者血常規檢測白細胞（WBC），粒細胞（Gran），單核細胞（MONO）及百分(fēn)比MONO% 明(míng)顯增加，分(fēn)别超出正常範圍的(de)百分(fēn)比爲33.3% (4/12)，25% (3/12)，41.6% (5/12)，33.3% (4/12)。淋巴細胞百分(fēn)比（LYMPH%）明(míng)顯減少，低于正常參考範圍的(de)比例爲25% (3/12)，血小闆未見明(míng)顯異常改變

（四）模型血免疫指标改變

HSP兔血清IgA升高(gāo)，IgG降低，C3，C4減少，IgE無明(míng)顯改變。外周血CD3⁺T細胞數目減少，CD4⁺T細胞減少，CD8⁺T細胞增多(duō)，CD8⁺T細胞所占百分(fēn)比升高(gāo)，CD4⁺T細胞百分(fēn)比下(xià)降，IL-2水(shuǐ)平下(xià)降，TNF-α水(shuǐ)平升高(gāo)。

長(cháng)春中醫藥大(dà)學4～12歲，住院 2～5天的(de)12名患者血清IgA， IgE升高(gāo)（p<0.01），IgG升高(gāo)（p<0.05），C3，C4減少（p<0.05）。血CD4+T細胞百分(fēn)比下(xià)降，CD4/CD8比值下(xià)降，IL-4、TNF-α水(shuǐ)平升高(gāo)，差别均具有統計學差異。

四、鑒定和(hé)評價的(de)其他(tā)材料

1.李彥紅，朱華，隋小龍，徐豔峰，楊亞軍，孫井江，黃(huáng)瀾，徐玉環，韓雲林(lín)，馮曉純，秦川*.初步探討(tǎo)過敏性紫癜兔模型的(de)構建，中國實驗動物(wù)學報，2013,21(5):36-41

2.李彥紅，朱華，徐豔峰，黃(huáng)瀾，隋小龍，徐玉環，馮曉純，秦川*.過敏性紫癜兔模型的(de)免疫學改變及機制初探，中國實驗動物(wù)學報，2013,21(6):65-69

3.Yanhong Li, Xiaochun Feng, Lan Huang, Hua Zhu, Yanfeng Xu, Xiaolong Sui, Yuhuan Xu, Yunlin Han, Chuan Qin*. Hematologic and immunological characteristics of Henoch-Scho¨nlein purpura in rat and rabbit models induced with ovalbumin based on type III hypersensitivity, Scientific Reports，2015，5(8862)：1- 6.