蛋白提取操作時(shí)的(de)注意事項

      避免蛋白降解

      z 總體規則：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白質的(de)步驟中，早些抑制，經常抑制

      z 分(fēn)裝蛋白溶液，儲存于不同的(de)溫度和(hé)不同的(de)緩沖液中，測蛋白活性，找出最适儲存條件。

      z 冷(lěng)藏，并加入穩定劑。這(zhè)些穩定劑一般都能充分(fēn)保持蛋白的(de) 生物(wù) 學活性。

      z 将蛋白溶液儲于50%（V/V)的(de)甘油或懸于硫酸铵（3.2M）中，避免凍存

      z 冰結晶會造成物(wù)理(lǐ)剪切及蛋白變性。

      z 避免酶的(de)反複凍融，如果酶需要凍存，分(fēn)裝成小管後凍存。

      蛋白質的(de)儲存

      z 蛋白樣品在液氮中速凍，拿出後加入10-20%的(de)甘油，長(cháng)期儲存

      z 整個(gè)實驗過程中，都要将蛋白樣品置于冰上

      z 從母管中吸取不同的(de)蛋白時(shí)，都要用(yòng)新鮮的(de)槍頭

      z 不要将未用(yòng)的(de)溶液倒回母管

      z 戴手套操作，避免蛋白交叉污染，或是 蛋白酶 的(de)污染

      z 避免劇烈的(de)震蕩，避免溶液中混入蛋白變性劑

      z 實驗的(de)過程中應避免灰塵進入，灰塵包含60%的(de)肌氨酸

      操作過程中

      z 操作時(shí)總是小體積小量的(de)操作，避免污染，并且動作要快(kuài)

      a：此類蛋白酶在活性中心包含絲氨酸和(hé)組氨酸。

      b：此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巯基，-SH - ）。

      c：此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子（如：Zn 2+ ，Ca 2+ ，Mn 2+ ）。

      d：此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。