一、研究背景

    生命早期（胚胎、新生兒(ér)、幼年）是機體腦(nǎo)發育的(de)關鍵時(shí)期，對(duì)應激的(de)敏感性極高(gāo)。該時(shí)期的(de)應激因素（如喪親、長(cháng)期與父母分(fēn)離以及兒(ér)童期受虐或忽視），可(kě)破壞腦(nǎo)的(de)結構和(hé)功能的(de)形成，對(duì)機體産生長(cháng)期甚至是終生的(de)影(yǐng)響，其中對(duì)情緒和(hé)認知功能的(de)影(yǐng)響最大(dà)，是青少年及成年神經精神疾患的(de)高(gāo)風險因素之一。

大(dà)鼠對(duì)環境的(de)應激反應更爲敏感，本研究建立了(le)大(dà)鼠母子分(fēn)離加早期離乳（Maternal separation with early weaning, MSEW）應激模型，用(yòng)于模拟生命早期應激事件。這(zhè)種雙重應激模型更好的(de)模拟了(le)人(rén)類累計的(de)應激效應（“cumulative” stress）導緻青少年和(hé)（或）成年發生神經精神疾患的(de)現象。本研究觀察了(le)MSEW模型雌雄大(dà)鼠成年的(de)行爲學表型和(hé)神經電生理(lǐ)變化(huà)。

二、制備方法

    1. 實驗動物(wù)及分(fēn)組：SD孕鼠。實驗分(fēn)爲雌性對(duì)照(zhào)，雌性MSEW組，雄性對(duì)照(zhào)，雄性MSEW組。

2. 實驗儀器：曠場(chǎng)實驗箱、高(gāo)架十字迷宮實驗箱、條件性恐懼測試分(fēn)析系統

3. 實驗操作規程：

大(dà)鼠幼崽出生第二天至第五天(postnatal day，PND2-5天)，從母鼠家籠移出，放置在另外房(fáng)間的(de)母子分(fēn)離實驗箱，4h/d, 實驗箱分(fēn)隔成開放獨立的(de)小隔間，每個(gè)隔間内放置一隻幼崽。實驗箱放在加熱(rè)墊上，溫度維持在32℃左右。PND 6-16天, 母子分(fēn)離8 h/d，母子分(fēn)離實驗在光(guāng)照(zhào)期進行，固定在8:00-18:00時(shí)間段。PND17天,大(dà)鼠幼崽離乳，雌雄分(fēn)籠。正常對(duì)照(zhào)組幼崽始終在母鼠家籠，至PND 21天離乳，正常換水(shuǐ)，換料，其餘不予幹擾。PND 6O天，進行空場(chǎng)實驗、高(gāo)架十字迷宮實驗、新物(wù)體識别實驗、Y迷宮實驗及Barnes 迷宮實驗。行爲學實驗結束，每組取3隻動物(wù)，麻醉，取腦(nǎo)，進行前額皮層神經電生理(lǐ)檢測。

三、討(tǎo)論和(hé)結論

    母子分(fēn)離加早期離乳，雄性大(dà)鼠顯示焦慮行爲，而雌性大(dà)鼠未顯示焦慮行爲。在非應激狀态下(xià)（ Y迷宮實驗），雌性大(dà)鼠空間工作記憶能力下(xià)降。在應激狀态下(xià)（Barnes迷宮實驗），雌性和(hé)雄性大(dà)鼠的(de)空間參考記憶能力均未受損。條件恐懼實驗結果顯示，雄性大(dà)鼠環境相關的(de)恐懼記憶能力增強。電生理(lǐ)實驗結果顯示，雄性大(dà)鼠前額皮層谷氨酸能神經元的(de)興奮性下(xià)降，可(kě)能是其焦慮行爲的(de)産生機制之一。母子分(fēn)離加早期離乳對(duì)成年大(dà)鼠影(yǐng)響的(de)性别差異，還(hái)需要進一步研究。

該研究在已報導的(de)小鼠母子分(fēn)離加早期離乳應激方法基礎上，首次制備了(le)大(dà)鼠母子分(fēn)離加早期離乳應激模型，注重了(le)應激因素的(de)累計效應，更接近臨床。本模型對(duì)于揭示早期生活應激事件和(hé)成年後神經精神障礙的(de)關系及分(fēn)子機制研究具有一定意義。本模型的(de)其他(tā)病理(lǐ)生理(lǐ)機制，還(hái)有待進一步研究。

四、鑒定和(hé)評價的(de)其他(tā)材料

     1. Sun X, Zhang Y, Li X, Liu X, Qin C: Early-Life Neglect Alters Emotional and Cognitive Behavior in a Sex-Dependent Manner and Reduces Glutamatergic Neuronal Excitability in the Prefrontal Cortex. Front Psychiatry 2020, 11:572224.

            2. Sun X, Yu X, Zhang L, Zhao W, Wang M, Zhang Y, Li X, Gao R, Breger LS, Dovero S et al: Comparison of the expression and toxicity of AAV2/9 carrying the human A53T α-synuclein gene in presence or absence of WPRE. Heliyon 2021, 7(2):e06302.