透射電鏡實驗(Transmission Electron Microscope,簡稱TEM),可(kě)以看到在光(guāng)學顯微鏡下(xià)無法看清的(de)小于0.2um的(de)細微結構,這(zhè)些結構稱爲亞顯微結構或超微結構。1932年Ruska發明(míng)了(le)以電子束爲光(guāng)源的(de)透射電子顯微鏡,電子束的(de)波長(cháng)要比可(kě)見光(guāng)和(hé)紫外光(guāng)短得(de)多(duō),并且電子束的(de)波長(cháng)與發射電子束的(de)電壓平方根成反比,也(yě)就是說電壓越高(gāo)波長(cháng)越短。目前TEM的(de)分(fēn)辨力可(kě)達0.2nm。
實驗原理(lǐ)是以電子束透過樣品經過聚焦與放大(dà)後所産生的(de)物(wù)像,投射到熒光(guāng)屏上或照(zhào)相底片上進行觀察。電子與樣品中的(de)原子碰撞而改變方向,從而産生立體角散射。散射角的(de)大(dà)小與樣品的(de)密度、厚度相關,因此可(kě)以形成明(míng)暗不同的(de)影(yǐng)像。由于電子易散射或被物(wù)體吸收,故穿透力低,制備超薄切片(通(tōng)常爲50~100 nm)。要在機體死亡後的(de)數分(fēn)鐘(zhōng)内取材,組織塊要小(1mm3以内),常用(yòng)戊二醛和(hé)锇酸雙重固定,包埋介質包埋,用(yòng)超薄切片機切成薄片,再經醋酸鈾和(hé)檸檬酸鉛等進行電子染色。
實驗流程1.取材 2.固定 3.脫水(shuǐ) 4.包埋 5.固化(huà) 6.超薄切片機切片(50-60 nm) 7.3%醋酸鈾-枸橼酸鉛雙染色 8.透射電鏡觀察,拍(pāi)片