掃描電鏡檢測是1965年發明(míng)的(de)較現代的(de)細胞生物(wù)學研究工具，它具有制樣簡單、放大(dà)倍數可(kě)調範圍寬、圖像的(de)分(fēn)辨率高(gāo)、景深大(dà)等特點。近年來(lái)，掃描電鏡已廣泛地應用(yòng)在生物(wù)學、醫學、等學科的(de)領域中。

一、掃描電鏡檢測實驗原理(lǐ)

   主要是通(tōng)過發射電子聚焦光(guāng)束來(lái)掃描樣品的(de)表面形态.電子束與樣品表面的(de)樣子發生作用(yòng),産生多(duō)種能夠被檢測的(de)信号,這(zhè)些信号就包含了(le)樣品的(de)表面形态和(hé)組成.染色。

二、掃描電鏡檢測實驗流程

1. 樣品的(de)初步處理(lǐ)

a.取材樣品面積可(kě)達8mm×8mm，厚度可(kě)達5mm。對(duì)于易卷曲的(de)樣品如血管、胃腸道粘膜等，可(kě)固定在濾紙或卡片紙上，以充分(fēn)暴露待觀察的(de)組織表面。

b.樣品的(de)清洗

(1)用(yòng)等滲的(de)生理(lǐ)鹽水(shuǐ)或緩沖液清洗；

(2)用(yòng)5%的(de)蘇打水(shuǐ)清洗；

(3)用(yòng)超聲震蕩或酶消化(huà)的(de)方法進行處理(lǐ)。

c. 固定

固定所用(yòng)的(de)試劑和(hé)透射電鏡樣品制備相同，常用(yòng)戊二醛及锇酸雙固定。由于樣品體積較大(dà)，固定時(shí)間應适當延長(cháng)。也(yě)可(kě)用(yòng)快(kuài)速冷(lěng)凍固定。

d. 脫水(shuǐ)

樣品經漂洗後用(yòng)逐級增高(gāo)濃度的(de)酒精或丙酮脫水(shuǐ)，然後進入中間液，一般用(yòng)醋酸異戊酯作中間液。

2. 樣品的(de)幹燥

a.空氣幹燥法

空氣幹燥法又稱自然幹燥法，就是将經過脫水(shuǐ)的(de)樣品，讓其暴露在空氣中使脫水(shuǐ)劑逐漸揮發幹燥。這(zhè)種方法的(de)大(dà)優點是簡便易行和(hé)節省時(shí)間；它的(de)主要缺點是在幹燥過程中，組織會由于脫水(shuǐ)劑揮發時(shí)表面張力的(de)作用(yòng)而産生收縮變形。因此，該方法一般隻适用(yòng)于表面較爲堅硬的(de)樣品。

b. 冷(lěng)凍幹燥法

(1)置于冷(lěng)凍保護劑中：将樣品置于冷(lěng)凍保護劑中浸泡數小時(shí)。常用(yòng)的(de)冷(lěng)凍保護劑爲10%～20%二甲基亞砜水(shuǐ)溶液，或15%～40%甘油水(shuǐ)溶液。

(2)驟冷(lěng)：将經過保護劑處理(lǐ)的(de)樣品迅速投入用(yòng)液氮預冷(lěng)至(150℃的(de)氟利昂冷(lěng)凍劑中，使樣品中的(de)水(shuǐ)分(fēn)很快(kuài)凍結。

(3)幹燥：将已凍結的(de)樣品移到冷(lěng)凍幹燥器内已預冷(lěng)的(de)樣品台上，抽真空，經幾小時(shí)或數天後，樣品即達到幹燥。本方法不需要脫水(shuǐ)，避免了(le)有機溶劑對(duì)樣品成分(fēn)的(de)抽提作用(yòng)，不會使樣品收縮，也(yě)是較早使用(yòng)的(de)方法。但是，由于花費時(shí)間長(cháng)，消耗液氮多(duō)，容易産生冰晶損傷，因此未被廣泛應用(yòng)。

3. 樣品的(de)導電處理(lǐ)(真空鍍膜法)

       真空鍍膜法是利用(yòng)真空膜儀進行的(de)。其原理(lǐ)是在高(gāo)真空狀态下(xià)把所要噴鍍的(de)金屬加熱(rè)，當加熱(rè)到熔點以上時(shí)，會蒸發成極細小的(de)顆粒噴射到樣品上，在樣品表面形成一層金屬膜，使樣品導電。噴鍍用(yòng)的(de)金屬材料應選擇熔點低、化(huà)學性能穩定、在高(gāo)溫下(xià)和(hé)鎢不起作用(yòng)以及有高(gāo)的(de)二次電子産生率、膜本身沒有結構。現在一般選用(yòng)金或金和(hé)碳。爲了(le)獲得(de)細的(de)顆粒，有用(yòng)鉑或用(yòng)金-钯、鉑-钯合金的(de)。金屬膜的(de)厚度一般爲10 nm～20 nm。真空鍍膜法所形成的(de)膜，金屬顆粒較粗，膜不夠均勻，操作較複雜(zá)并且費時(shí)，目前已經較少使用(yòng)。4. 拍(pāi)攝