染色質免疫共沉澱CHIP實驗

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染色質免疫共沉澱CHIP實驗

染色質免疫共沉澱CHIP實驗

      染色質免疫共沉澱CHIP實驗的(de)原理(lǐ)是在活細胞狀态下(xià)固定蛋白質-DNA複合物(wù),并将其随機切斷爲一定長(cháng)度範圍内的(de)染色質小 片段,然後通(tōng)過免疫學方法沉澱此複合體,特異性地富集目的(de)蛋白結合的(de)DNA的(de)片段,通(tōng)過對(duì)目的(de)片斷的(de)純化(huà)與檢測,從而獲得(de)蛋 白質與DNA相互作用(yòng)的(de)信息。


      實驗原理(lǐ):
      在保持組蛋白和(hé)DNA聯合的(de)同時(shí),染色質被切成很小的(de)片斷,通(tōng)過運用(yòng)對(duì)應于一個(gè)特定組蛋白标記的(de)生物(wù)抗體,将目标片段(組蛋白發生特異标記的(de)片段)沉澱下(xià)來(lái)。ChIP是利用(yòng)抗原和(hé)抗體的(de)特異性結合以及細菌蛋白質的(de)“protein A”特異性地結合到免疫球蛋白的(de)Fc片段的(de)現象合用(yòng)開發出來(lái)的(de)方法(免疫磁珠結合proteinA,proteinA結合抗體Fc段,抗體結合抗原即發生特異标記的(de)組蛋白,這(zhè)裏要注意組蛋白是和(hé)DNA結合的(de),這(zhè)樣就把目标組蛋白和(hé)DNA的(de)複合體沉澱下(xià)來(lái)了(le))。再将組蛋白與DNA分(fēn)離,用(yòng)獲得(de)的(de)DNA去做(zuò)PCR分(fēn)析和(hé)序列測定等檢測技術,從而進一步檢測哪些基因的(de)組蛋白發生了(le)修飾。
 


上一個(gè): 組織樣本WB實驗
下(xià)一個(gè): 漿蛋白WB實驗