蛋白提取實驗是進行蛋白質實驗分(fēn)析的(de)基本操作,可(kě)用(yòng)于（1 ）蛋白質的(de)分(fēn)離（ 2 ）蛋白質功能結構檢測（3 ）蛋白質表達前的(de)基本操作。

      一、培養的(de)貼壁動物(wù)細胞的(de)蛋白質抽提步驟
      1、從貼壁細胞培養瓶中小心傾去培養液。
      2、預冷(lěng)的(de)PBS清洗貼壁的(de)細胞2次,小心傾去PBS.
      3、配置含抑制劑的(de)蛋白質抽提試劑( 1ml抽提試劑中加入5 μl蛋白酶抑制劑混台液, 5 μl PMSF和(hé)5 μl磷酸酶混合液)。
      4.、細胞瓶中加入預冷(lěng)的(de)含抑制劑的(de)蛋白質抽提試劑( 107個(gè)細胞中加入1ml抽提試劑;  5x 106個(gè)細胞中加入0.5ml抽提試劑) , 輕輕搖動5分(fēn)鐘(zhōng)。
      5、用(yòng)預冷(lěng)的(de)橡膠和(hé)塑料細胞刮将培養瓶壁上貼壁細胞刮下(xià)來(lái),轉移細胞懸浮液到離心管中,冰浴下(xià)搖動15分(fēn)鐘(zhōng)進行裂解。
      6、裂解液于預冷(lěng)的(de)離心機中14 , 000xg離心15分(fēn)鐘(zhōng)。棄去沉澱，上清液立刻轉移入新的(de)離心管中保存待用(yòng)。
      

      二、培養的(de)懸浮動物(wù)細胞的(de)蛋白質抽提步驟
      1、2500xg離 心10分(fēn)鐘(zhōng)沉澱懸浮的(de)細胞,棄去上清液
      2、預冷(lěng)的(de)PBS懸浮沉澱細胞, 2500xg離心10分(fēn)鐘(zhōng)沉澱細胞,去上清。
      3、配置含抑制劑的(de)蛋白質抽提試劑( 1ml抽提試劑中加入5蛋白酶抑制劑混合液, 5 μl PMSF和(hé)5 μ|磷酸酶混合液)。
      4、加入含抑制劑的(de)預冷(lěng)蛋白質抽提試劑( 107個(gè)細胞中加入1ml抽提試劑; 5x 106個(gè)細胞中加入0.5ml抽提試劑)
      5、輕輕搖動混和(hé)15分(fēn)鐘(zhōng)進行裂解。
      6、裂解液于預冷(lěng)的(de)離心機中14 , 000xg離心15分(fēn)鐘(zhōng)。棄去沉澱，上清液立刻轉移入新的(de)離心管中保存待用(yòng)。

      三、哺乳動物(wù)組織的(de)蛋白質抽提步驟
      1、組織稱重,切小塊放入管中。
      2、配置含抑制劑的(de)蛋白質抽提試劑( 1ml抽提試劑中加入5 μl蛋白酶抑制劑混台液, 5 μl PMSF和(hé)5u|磷酸酶混合液)。
      3、加入預冷(lěng)的(de)含抑制劑的(de)蛋白質抽提試劑( 250mg組織中加入1ml抽提試劑)。
      4、用(yòng)勻漿器每次30秒低速勻漿,每次勻漿間隔冰浴1分(fēn)鐘(zhōng),至組織*裂解。
      5、裂解液于預冷(lěng)的(de)離心機中14 , 000xg離心15分(fēn)鐘(zhōng)。上清液立刻轉移入 新的(de)離心管中保存待用(yòng)。