Pull-down實驗及原理(lǐ)

      Pull down是一種研究蛋白質或RNA與蛋白質相互作用(yòng)的(de)體外方法，這(zhè)裏主要講研究蛋白與蛋白互作的(de)pull-down實驗。在Pull-down實驗中，首先要利用(yòng)基因重組技術構建含有親和(hé)标簽與誘餌蛋白基因的(de)載體，然後通(tōng)過表達純化(huà)得(de)到帶親和(hé)标簽的(de)誘餌蛋白，該誘餌蛋白可(kě)固定在某種基質上以吸附細胞裂解液中的(de)能與誘餌蛋白互作的(de)蛋白，之後再通(tōng)過洗脫即可(kě)得(de)到目的(de)蛋白，對(duì)目的(de)蛋白進行檢測可(kě)實現誘餌蛋白與目的(de)蛋白相互作用(yòng)的(de)分(fēn)析。

      Pull-down實驗的(de)基本原理(lǐ)是将一種含親和(hé)标簽的(de)蛋白質作爲“誘餌蛋白”固定于某種基質上，當細胞或組織裂解液經過該基質時(shí)，可(kě)與“誘餌蛋白”相互作用(yòng)的(de)蛋白就會被吸附，而沒有被吸附的(de)其他(tā)蛋白質則被洗脫液洗脫，被吸附的(de)蛋白可(kě)以通(tōng)過改變洗脫液或洗脫條件而被回收，從而獲得(de)能與已知蛋白（即帶親和(hé)标簽的(de)誘餌蛋白）相互作用(yòng)的(de)蛋白。誘餌蛋白上的(de)親和(hé)标簽是pull down實驗的(de)基礎。常見的(de)誘餌蛋白的(de)親和(hé)标簽包括谷胱甘肽S-轉移酶（GST）标簽和(hé)多(duō)組氨酸（6×His）标簽。Pull-down實驗後可(kě)以對(duì)獲得(de)的(de)互作蛋白進行電泳分(fēn)析或質譜鑒定等，以确定已知蛋白或發現未知蛋白。

      Pull down串聯質譜

      Pull down實驗也(yě)叫做(zuò)蛋白質體外結合實驗，是一種在體外研究蛋白質與蛋白質相互作用(yòng)的(de)簡單而靈敏的(de)技術。Pull-down實驗，通(tōng)過帶親和(hé)标簽的(de)誘餌蛋白可(kě)以把細胞或組織裂解液中與誘餌蛋白相互作用(yòng)的(de)蛋白質拉下(xià)來(lái)。串聯質譜用(yòng)于被拉下(xià)來(lái)的(de)蛋白質的(de)分(fēn)析鑒定，然後就可(kě)以确認與誘餌蛋白互作的(de)蛋白是不是研究者預想的(de)蛋白質，以及得(de)到互作蛋白是什(shén)麽蛋白等信息。