總RNA提取

      1. 取200mg組織，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。

      2. 震蕩30s。

      3. 加0.2ml氯仿，劇烈搖動30s，室溫3min。

      4. 12000×g，4℃ 離心，15min。

      5. 吸上層無色水(shuǐ)相，移入另一EP管中（約0.5ml）。

      6. 加等體積異丙醇，-20℃，30min。

      7. 12000×g，4℃ 離心，10min。在管底部可(kě)見微量RNA沉澱

      8. 棄上清，加75%乙醇1ml，振蕩。

      9. 7500×g，4℃ 離心，10min。

      10. 棄上清，用(yòng)濾紙小心吸取殘留液體，室溫幹燥5-10min。

      11. 沉澱溶于20μl DEPC水(shuǐ)，取1μl加入79μl DEPC水(shuǐ)測OD260/OD280

      12. 計算(suàn)濃度與純度，-70℃保存。

      逆轉錄合成 cDNA

      反應體系如下(xià)

      混勻快(kuài)速離心一次

      反應條件如下(xià)

      -20℃ 冰箱凍存

      PCR反應

      混勻快(kuài)速離心一次

      PCR産物(wù)-20℃冰箱保存

      取PCR産物(wù)8μl 加5×Loading Buffer 2μl 2%瓊脂糖凝膠電泳120V

      100mA 30min 溴化(huà)乙錠染色，凝膠成象儀成象并保存結