TRIzol試劑适用(yòng)于從細胞和(hé)組織中快(kuài)速分(fēn)離RNA。TRIzol試劑有多(duō)組分(fēn)分(fēn)離作用(yòng)，與其他(tā)方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大(dà)特點是可(kě)同時(shí)分(fēn)離一個(gè)樣品的(de)RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化(huà)，細胞裂解，溶解細胞内含物(wù)，同時(shí)因含有RNase抑制劑可(kě)保持RNA的(de)完整性。在加入氯仿離心後，溶液分(fēn)爲水(shuǐ)相和(hé)有機相，RNA在水(shuǐ)相中。取出水(shuǐ)相用(yòng)異丙醇沉澱可(kě)回收RNA；用(yòng)乙醇沉澱中間層可(kě)回收DNA；用(yòng)異丙醇沉澱有機相可(kě)回收蛋白質。

     TRIzol試劑可(kě)用(yòng)于小量樣品（50～100mg組織、5×106細胞）也(yě)适用(yòng)于大(dà)量樣品（≥1g組織、>107細胞）。對(duì)人(rén)，動物(wù)，植物(wù)組織，細菌均适用(yòng)，可(kě)同時(shí)處理(lǐ)大(dà)量不同樣品，整個(gè)提取過程在一小時(shí)内即可(kě)完成。

      分(fēn)離的(de)總RNA無蛋白質和(hé)DNA污染，可(kě)用(yòng)于Northern Blot，dot blot，ployA篩選，體外翻譯，RNase保護分(fēn)析和(hé)分(fēn)子克隆。在用(yòng)于RT-PCR時(shí)如果兩條引物(wù)存在于一個(gè)單一外顯子内，建議(yì)用(yòng)無RNase的(de)DNaseⅠ處理(lǐ)RNA樣品，避免出現假陽性。共純化(huà)的(de)DNA可(kě)用(yòng)作标準，比較不同樣品RNA的(de)得(de)率，也(yě)可(kě)用(yòng)于PCR和(hé)酶切。蛋白質可(kě)用(yòng)于Western Blotting。

      規格：100ml 黃(huáng)色透明(míng)液體

      儲存條件：2～8℃避光(guāng)保存12個(gè)月(yuè)

      注意：請勿直接接觸皮膚或吞咽，以免灼傷。如接觸皮膚應立即用(yòng)洗滌劑和(hé)大(dà)量水(shuǐ)沖洗。忌用(yòng)乙醇擦洗，乙醇會加重灼傷程度。

      預防RNase污染注意事項：

      1.經常更換新手套，皮膚上常帶有的(de)細菌，黴菌可(kě)能成爲RNase的(de)來(lái)源。

      2.使用(yòng)滅過菌的(de)RNA專用(yòng)塑料制品避免交叉污染。

      3.RNA在TRIzol試劑中時(shí)不會被RNase污染，但提取後繼續處理(lǐ)過程中應使用(yòng)不含RNase的(de)塑料和(hé)玻璃器皿。玻璃器皿可(kě)在150℃烘烤4小時(shí)，塑料制品可(kě)在0.5M NaOH中浸泡10分(fēn)鐘(zhōng)，然後用(yòng)水(shuǐ)徹底清洗，高(gāo)壓滅菌，即可(kě)去除RNase。

      4.配制溶液應使用(yòng)無RNase的(de)水(shuǐ)（将水(shuǐ)加入處理(lǐ)過不含RNase的(de)玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.01℅v/v，放置過夜，高(gāo)壓滅菌。注：DEPC有緻癌之嫌，需小心操作）。

      RNA的(de)提取

      準備試劑：氯仿，異丙醇，75℅乙醇，無RNase的(de)水(shuǐ)或0.5℅SDS（溶液均需用(yòng)DEPC處理(lǐ)過的(de)水(shuǐ)配制）。

      操作步驟：

      1. 勻漿處理(lǐ)：

      a.組織将組織在液氮中磨碎，每50～100mg組織加入1ml TRIzol，用(yòng)勻漿儀進行勻漿處理(lǐ)。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

      b.單層培養細胞　直接在培養闆中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積（即3.5cm直徑的(de)培養闆）加1ml，用(yòng)移液器吸打幾次。TRIzol的(de)用(yòng)量應根據培養闆面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可(kě)能導緻提取的(de)RNA有DNA污染。

      c.細胞懸液離心收集細胞，每5～10×106動物(wù)、植物(wù)、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1mlTRIzol，反複吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和(hé)細菌細胞需用(yòng)勻漿儀處理(lǐ)。

      2.将勻漿樣品在室溫（15～30℃）放置5分(fēn)鐘(zhōng)，使核酸蛋白複合物(wù)完全分(fēn)離。

      3.可(kě)選步驟：如樣品中含有較多(duō)蛋白質，脂肪，多(duō)糖或胞外物(wù)質（肌肉，植物(wù)結節部分(fēn)等）可(kě)于2～8℃10000×g離心10分(fēn)鐘(zhōng)，取上清。離心得(de)到的(de)沉澱中包括細胞外膜，多(duō)糖，高(gāo)分(fēn)子量DNA，上清中含有RNA。處理(lǐ)脂肪組織時(shí)，上層有大(dà)量油脂應去除。取澄清的(de)勻漿液進行下(xià)一步操作。

      4. 每使用(yòng)1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分(fēn)鐘(zhōng)。

      5. 2-8℃10000×g離心15分(fēn)鐘(zhōng)。樣品分(fēn)爲三層：底層爲黃(huáng)色有機相，上層爲無色水(shuǐ)相和(hé)一個(gè)中間層。RNA主要在水(shuǐ)相中，水(shuǐ)相體積約爲所用(yòng)TRIzol試劑的(de)60℅。

      6. 把水(shuǐ)相轉移到新管中，如要分(fēn)離DNA和(hé)蛋白質可(kě)保留有機相，進一步操作見後。用(yòng)異丙醇沉澱水(shuǐ)相中的(de)RNA。每使用(yòng)1mlTRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分(fēn)鐘(zhōng)。