一、實驗目的(de)

      學習(xí)和(hé)掌握外源基因導入真核細胞的(de)主要方法——脂質體介導的(de)轉染。了(le)解外源基因進入的(de)一般性方法，觀測外源蛋白的(de)表達（綠(lǜ)色熒光(guāng)蛋白），爲染色準備實驗材料。

      二、實驗原理(lǐ)

      外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和(hé)脂質體介導法和(hé)病毒介導法。電擊法是在細胞上短時(shí)間暫時(shí)性的(de)穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和(hé)脂質體法是利用(yòng)不同的(de)載體物(wù)質攜帶質粒通(tōng)過直接穿膜或者膜融合的(de)方法使得(de)外源基因進入細胞；病毒法是利用(yòng)包裝了(le)外源基因的(de)病毒感染細胞的(de)方法使得(de)其進入細胞。但是由于電擊法和(hé)磷酸鈣法的(de)實驗條件控制較嚴、難度較大(dà)；病毒法的(de)前期準備較複雜(zá)、而且可(kě)能對(duì)于細胞有較大(dà)影(yǐng)響；所以現在對(duì)于很多(duō)普通(tōng)細胞系，一般的(de)瞬時(shí)轉染方法多(duō)采用(yòng)脂質體法。

      利用(yòng)脂質體轉染法最重要的(de)就是防止其毒性，因此脂質體與質粒的(de)比例，細胞密度以及轉染的(de)時(shí)間長(cháng)短和(hé)培養基中血清的(de)含量都是影(yǐng)響轉染效率的(de)重要問題，通(tōng)過實驗摸索的(de)合适轉染條件對(duì)于效率的(de)提高(gāo)有巨大(dà)的(de)作用(yòng)。

      三、實驗材料與器材

      1、材料

      293T細胞

      MyoD表達質粒和(hé)EGFP表達質粒

      DMEM培養基

      鏈黴素/青黴素（雙抗）

      FCS（小牛血清）

      PBS（磷酸鹽緩沖溶液）

      胰酶/EDTA消化(huà)液

      轉染試劑（TransFast