穩轉細胞構建實驗：用(yòng)脂質體轉染法或慢(màn)病毒侵染的(de)方法将構建好的(de)含靶基因的(de)載體導入細胞，根據不同的(de)基因載體中所含的(de)抗性标志選用(yòng)相應的(de)藥物(wù)進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的(de)基礎上，得(de)到單細胞長(cháng)出的(de)陽性單克隆，繼而得(de)到穩轉轉染細胞株。

       穩轉株構建實驗原理(lǐ)：

       穩轉細胞株是指經合适的(de)藥物(wù)濃度進行藥物(wù)篩選後，得(de)到外源DNA穩定整合到宿主染色體，并可(kě)以長(cháng)時(shí)間表達外源目的(de)基因的(de)細胞。穩定表達細胞株彌補了(le)瞬時(shí)感染(或轉染)實驗中外源基因表達時(shí)間短的(de)缺陷，便于長(cháng)期觀察。穩轉細胞的(de)篩選需根據不同基因載體中所含有的(de)抗性标志選用(yòng)相應的(de)藥物(wù)，常用(yòng)的(de)抗性篩選有嘌呤黴素(puromycin)、 新黴素(neomycin)等。若實驗需求構建穩轉細胞株，我們建議(yì)通(tōng)過慢(màn)病毒感染細胞進行藥物(wù)篩選的(de)方法，此方法較質粒轉染可(kě)以更加有效的(de)将外源基因整合入基因組，且整合位點處于轉錄相對(duì)活躍的(de)區(qū)域，從而獲得(de)更加高(gāo)效表達外源基因的(de)穩轉株細胞。