中文名稱:   非酒精性脂肪性肝病斑馬魚模型       英文名稱: NA
  類型:   非酒精性脂肪性肝病動物(wù)模型                  分(fēn)級: NA
  研制單位:   中國醫學科學院醫藥生物(wù)技術研究所 保存單位: 中國醫學科學院醫藥生物(wù)技術研究所
  主要用(yòng)途:   用(yòng)于非酒精性脂肪性肝病（Non-Alcoholic Fatty Liver Disease, NAFLD）研究。
是否通(tōng)過鑒定與評價:   否
一、研究背景
一、疾病名稱 
       非酒精性脂肪性肝病（Non-Alcoholic Fatty Liver Disease, NAFLD）
 二、臨床發病機制及症狀  
       非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)被認爲是僅次于酒精和(hé)病毒性肝炎導緻肝硬 化(huà)的(de)第三大(dà)病因。NAFLD 是指除外酒精和(hé)其他(tā)明(míng)确的(de)肝損傷因素所緻的(de)，以彌 漫性肝細胞大(dà)泡性脂肪爲主要特征的(de)臨床病理(lǐ)綜合征，包括單純性脂肪性肝病以 及由其演變的(de)脂肪性肝炎和(hé)肝硬化(huà)。肥胖、II 型糖尿病、高(gāo)脂血症等單獨或共同 成爲 NAFLD 的(de)誘因。NAFLD 多(duō)伴有中心性肥胖、胰島素抵抗和(hé)脂質代謝紊亂，也(yě)被認爲是代謝綜合征的(de)一種表現。病理(lǐ)特征：以大(dà)泡性或以大(dà)泡性爲主的(de)肝細胞 脂肪變性爲特征。 
三、模式動物(wù) 
       斑馬魚(Zebrafish, Danio rerio) AB 或 TU 野生型品系均可(kě)。
二、制備方法
1. 實驗動物(wù) 
     野生型斑馬魚 AB 品系。 
2. 造模化(huà)合物(wù)及斑馬魚處理(lǐ) 
     采用(yòng)高(gāo)脂、高(gāo)糖、高(gāo)膽固醇三種飲食方案飼喂斑馬魚幼體。具體方案見圖1 （Ref.1）。主要步驟：取野生型斑馬魚幼體(5 dpf)，随機分(fēn)爲4組：正常飲食(30 mg/d AP100)、高(gāo)膽固醇(30 mg/d AP100 plus 4% (w/w) cholesterol)、高(gāo)糖(30 mg/d AP100 plus 0.25%(w/v) fructose)、高(gāo)脂(180 mg/d AP100)，按照(zhào)gezi 飲食方案飼 喂10天。飼喂終止後，空腹過夜，收集幼體進行後續實驗檢測。爲了(le)觀察膽固醇 在體内的(de)分(fēn)布，在4組食物(wù)中添加BODIPY 标記的(de)膽固醇(10μg/g cholesteryl BODIPY 542/563-C11, Invitrogen)。 
3. 模型分(fēn)析指标 
（1） 症狀觀察 2 觀察和(hé)拍(pāi)照(zhào)斑馬魚表型；測量斑馬魚幼體體長(cháng)和(hé)稱重，統計學處理(lǐ)并比較 4 組數據。 
（2） 病理(lǐ)檢測 A. 對(duì)斑馬魚整體進行油紅染色，檢測體内脂質蓄積水(shuǐ)平和(hé)分(fēn)布；熒光(guāng)顯微鏡 下(xià)觀察 BODIPY 标記的(de)膽固醇在體内的(de)分(fēn)布和(hé)強度。B. 肝髒冰凍切片和(hé)油紅 O 染 色；C. 肝髒石蠟切片和(hé) H.E 染色。 
（3） 病理(lǐ)診斷 采用(yòng)肝髒組織切片和(hé) HE 染色檢測，以脂質/膽固醇在肝髒蓄積、或以大(dà)泡性 爲主的(de)肝細胞脂肪變性爲特征。 
三、評價與驗證
 1. 動物(wù)症狀觀察 高(gāo)膽固醇、高(gāo)糖、高(gāo)脂飲食的(de)三組幼體體長(cháng)均比 WT 組幼體體長(cháng)增長(cháng)。但高(gāo)膽 固醇、高(gāo)脂飲食導緻斑馬魚體重增加、肝區(qū)擴大(dà)，高(gāo)脂組的(de)幼體腹部和(hé)頭部的(de)透 明(míng)度明(míng)顯降低。高(gāo)糖組體重未見變化(huà)，但頭部和(hé)内髒區(qū)透明(míng)度也(yě)明(míng)顯下(xià)降。 
 高(gāo)膽固醇、高(gāo)糖或高(gāo)脂飲食對(duì)斑馬魚幼體生長(cháng)的(de)影(yǐng)響 (A) 四組不同飼喂方案；(B) 四組飲食飼喂終點時(shí)的(de)幼體表型；(C) 幼體在15 dpf 的(de)平均體 3 長(cháng) (n = 20).；和(hé)平均體重(n = 10，每組從100條中随機取10條幼體稱重）。a, 與對(duì)照(zhào)組比較; b, 與EF組比較; c, 與HF組比較; *P < 0.05, #P < 0.01; Bar = 1 mm. 2. 病理(lǐ)改變 體内總膽固醇和(hé)總脂升高(gāo)，顯微鏡下(xià)可(kě)見肝髒有明(míng)顯脂質蓄積和(hé)脂肪泡，肝 結構改變。
生化(huà)指标檢測顯示：過量飲食組的(de)總脂質/甘油三酯、膽固醇 和(hé)葡萄糖均明(míng)顯高(gāo)于對(duì)照(zhào)組。膽固醇組的(de)總脂質/膽固醇明(míng)顯高(gāo)于對(duì)照(zhào)組，甘油三 酯略高(gāo)，葡萄糖低于對(duì)照(zhào)組。高(gāo)糖組的(de)總脂質、甘油 三酯和(hé)葡萄糖均高(gāo)于對(duì)照(zhào)組， 而膽固醇水(shuǐ)平與對(duì)照(zhào)相當。
脂質在斑馬魚幼體體内的(de)蓄積 A. 油紅染色示不同飲食組的(de)幼體肝區(qū)脂質水(shuǐ)平；B. 示四組幼體肝區(qū)膽固醇的(de)蓄積平； C. 示四組幼體軀幹血管的(de)膽固醇水(shuǐ)平； D. 肝髒冰凍切片和(hé)油紅 O 染色顯示脂質在肝區(qū)的(de) 蓄積和(hé)脂肪變性；E. 肝髒石蠟切片和(hé) H.E 染色顯示肝小葉排列變化(huà)和(hé)肝細胞内脂肪泡情況； F. 油紅染色陽性區(qū)半定量統計比較；G. 膽固醇與每毫克蛋白之比；H. 甘油三酯與每毫克蛋 白之比；I. 糖與每毫克蛋白之比。F-I 數據來(lái)自斑馬魚肝髒。*P < 0.05 vs. Control. Bar =100 μm。