一、研究背景

1、造模因素信息

  環磷酰胺（Cyclophosphamide，CTX）是進入人(rén)體内被肝髒或腫瘤内存在的(de)過量的(de)磷酰胺酶或磷酸酶水(shuǐ)解，變爲活化(huà)作用(yòng)型的(de)磷酰胺氮芥而起作用(yòng)的(de)氮芥類衍生物(wù)。抗瘤譜廣，是第一個(gè)所謂“潛伏化(huà)”廣譜抗腫瘤藥，對(duì)白血病和(hé)實體瘤都有效。同時(shí)作爲免疫抑制劑，用(yòng)于各種自身免疫性疾病，如嚴重類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、兒(ér)童腎病綜合征、多(duō)發性肉芽腫、天疱瘡以及潰瘍性結腸炎、特發性血小闆減少性紫癜等。也(yě)用(yòng)于器官移植時(shí)抗排斥反應，通(tōng)常與潑尼松、抗淋巴細胞球蛋白合用(yòng)。

2、實驗動物(wù)背景信息

健康幼年（3周齡，10 g左右）、青年（8周齡，22 g左右）、老年（14月(yuè)齡，30 g左右）雄性C57BL/6J小鼠（SPF級）。

3、研究背景

接受藥物(wù)治療的(de)患者中，有相當一部分(fēn)是特殊人(rén)群，如新生兒(ér)、嬰幼兒(ér)、兒(ér)童、妊娠期和(hé)哺乳期婦女(nǚ)、老年人(rén)等，因其生理(lǐ)、生化(huà)和(hé)病理(lǐ)等機制與普通(tōng)人(rén)群存在較大(dà)差異，有著(zhe)不同的(de)藥代動力學和(hé)藥效學特征，用(yòng)藥安全形勢十分(fēn)嚴峻。

免疫系統可(kě)以對(duì)病原體侵入人(rén)體做(zuò)出适度反應，從而保持人(rén)體的(de)内環境穩定。免疫系統的(de)免疫應答(dá)可(kě)分(fēn)爲固有免疫和(hé)獲得(de)性免疫。固有免疫細胞是機體非特異免疫的(de)重要組成部分(fēn)，包括中性粒細胞、NK 細胞等；獲得(de)性免疫包括參與體液免疫的(de)B 細胞及參與細胞免疫的(de)T 細胞等。一般來(lái)說，人(rén)至青春期免疫系統才發育成熟，兒(ér)童免疫細胞表現出數量不足和(hé)功能不成熟。成年人(rén)的(de)免疫系統日趨成熟，随著(zhe)年齡的(de)增長(cháng)，人(rén)的(de)免疫功能逐漸衰退，60 歲以上老人(rén)T 細胞、B 細胞、NK 細胞等會出現生成數量減少或代謝活力下(xià)降等現象。

少年兒(ér)童免疫系統發育不成熟，疾病譜與成年人(rén)多(duō)有不同。所以在用(yòng)藥方面在考慮有效性的(de)同時(shí)還(hái)要考慮用(yòng)藥安全尤其的(de)遠(yuǎn)期的(de)安全性，以保證患者痊愈後的(de)生存質量。如抗腫瘤藥物(wù)的(de)研發，兒(ér)童腫瘤多(duō)來(lái)源于中胚層，在藥物(wù)選擇性上與成年人(rén)不同。對(duì)藥物(wù)的(de)代謝差異也(yě)影(yǐng)響到了(le)藥物(wù)毒副作用(yòng)尤其是對(duì)健康的(de)遠(yuǎn)期影(yǐng)響都需要注意。

老年人(rén)視爲“特殊人(rén)群”，因爲他(tā)們在共病多(duō)、同時(shí)使用(yòng)多(duō)種藥物(wù)，在藥代動力學、發生藥物(wù)不良反應（ADR）方面與年輕人(rén)不同。醫療實踐通(tōng)常基于從臨床試驗中得(de)出的(de)單一疾病指南(nán)，這(zhè)些臨床試驗不包括體弱的(de)老年人(rén)或患有多(duō)種疾病的(de)人(rén)。這(zhè)些則易導緻老年人(rén)用(yòng)藥不良反應事件增加。

綜上，在臨床前安全性研究中，采用(yòng)幼年及老年動物(wù)進行實驗觀察逐年來(lái)引起了(le)重視，是爲臨床用(yòng)藥提供參考數據。

環磷酰胺作爲一種免疫抑制劑，已有大(dà)量研究表明(míng)其能抑制體液和(hé)細胞免疫應答(dá)，對(duì)B 細胞損傷作用(yòng)尤爲明(míng)顯。本研究利用(yòng)幼年鼠及老年鼠制備CTX免疫模型，觀察CTX處理(lǐ)後不同年齡小鼠免疫細胞損傷及恢複情況，爲特殊人(rén)群用(yòng)藥提供模型。

參考文獻：

Barry E, Walsh JA, Weinrich SL, Beaupre D, Blasi E, Arenson DR, Jacobs IA. Navigating the Regulatory Landscape to Develop Pediatric Oncology Drugs: Expert Opinion Recommendations. Paediatr Drugs. 2021 Jul;23(4):381-394.

Davies EA, O'Mahony MS. Adverse drug reactions in special populations - the elderly. Br J Clin Pharmacol. 2015 Oct;80(4):796-807. doi: 10.1111/bcp.12596. Epub 2015 May 22. PMID: 25619317; PMCID: PMC4594722.

Wang J, Avant D, Green D, Seo S, Fisher J, Mulberg AE, McCune SK, Burckart GJ. A Survey of Neonatal Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Studies in Pediatric Drug Development. Clin Pharmacol Ther. 2015 Sep;98(3):328-35. doi: 10.1002/cpt.149. PMID: 25975723.

二、制備方法

1 動物(wù)分(fēn)組與模型制備    幼年（3周齡，10 g左右）、青年（8周齡，22 g左右）、老年（14月(yuè)齡，30 g左右）雄性C57BL/6J小鼠（SPF級）各32隻購(gòu)于北(běi)京華阜康生物(wù)科技股份有限公司。CTX組成年鼠、老年鼠腹腔注射環磷酰胺100mg/kg，分(fēn)兩次隔天給藥，50mg/kg/次。幼年鼠腹腔注射環磷酰胺劑量爲72mg/kg【同種動物(wù)間劑量換算(suàn)公式：Dose(b)=Dose(a)×(W_b/W_a)^2/3,W爲體重(Kg)】，分(fēn)兩次隔天給藥，36mg/kg/次。對(duì)照(zhào)組腹腔注射等劑量生理(lǐ)鹽水(shuǐ)。分(fēn)别于給藥後第3天，7天，2周，4周檢測各年齡小鼠造血免疫指标。

2 主要試劑與儀器   NK1.1 ，CD11b， F4/80，CD4，CD25，Foxp3抗體購(gòu)自eBioscience公司；Foxp3 Buffer Set，CD8a，B220抗體購(gòu)自BD公司。注射用(yòng)環磷酰胺購(gòu)自江蘇恒瑞醫藥股份有限公司（産品批号：14092925）。小鼠ELISA試劑盒購(gòu)自杭州聯科生物(wù)技術股份有限公司（産品批号：70-E-EK2742(IgA) 、70-E-EK2712(IgG)、70-E-EK2762(IgM)）。137Csγ射線照(zhào)射源，加拿大(dà)原子能有限公司，GAMMA-CELL40，劑量率0.80Gy/min。流式細胞儀C6（美(měi)國BD），全自動血液分(fēn)析儀MEK-7222K（日本光(guāng)電），酶标儀MK3（Thermo Multiskan）

3 模型評價方法

3.1 外周血血常規檢測     給藥後第3天、7天、2周、4周，小鼠眼内眦取血，EDTA-K3 抗凝，用(yòng)全自動血細胞計數儀測定白細胞數（WBC）、淋巴細胞數、淋巴細胞百分(fēn)比、中性粒細胞百分(fēn)比。

3.2 器官指數測定    小鼠稱重後取小鼠胸腺、脾髒稱重，計算(suàn)胸腺、脾髒指數（器官指數=器官重量（mg）/小鼠體重（g））。

3.3 外周血IgA、IgG、IgM測定    取10ul抗凝血漿，稀釋10000倍備用(yòng)。複孔加入50ul 1×檢測緩沖液和(hé)50ul 2倍倍比稀釋的(de)标準品。15分(fēn)鐘(zhōng)内，樣本孔加入90ul 1×檢測緩沖液和(hé)10ul預稀釋的(de)樣本。室溫孵育2小時(shí)。洗滌後每孔加入100ul稀釋的(de)檢測抗體。室溫孵育1小時(shí)。洗滌後每孔加入100ul顯色底物(wù)，避光(guāng)，室溫孵育5-30分(fēn)鐘(zhōng)。每孔加入100ul終止液。在450nm波長(cháng)檢測OD值。

3.4 外周血淋巴細胞分(fēn)型測定    每管取50ul抗凝血，按照(zhào)流式表面染色方法分(fēn)别标記CD4/CD8a和(hé)NK1.1/ F4/80/B220/CD11b。室溫避光(guāng)孵育30min，加入1ml 紅細胞裂解液，室溫裂解10min。1000r/min離心5min後棄上清，緩沖液洗滌1次後加入300ulPBS，4°C保存待檢。用(yòng)流式細胞儀檢測NK細胞、巨噬細胞（CD11b⁺F4/80⁺）、B細胞、CD4⁺T細胞，CD8a⁺T細胞比例。外周血B220細胞，CD4⁺T細胞，CD8a⁺T細胞絕對(duì)數計算(suàn)方法：細胞數（10⁹/L）=B220細胞，CD4⁺T細胞，CD8a⁺T細胞在總細胞中占比×淋巴細胞數。

3.5 脾髒淋巴細胞分(fēn)型測定    制備脾細胞懸液，調整細胞濃度爲10^7 /ml，取100ul 細胞懸液加到EP管中。按照(zhào)流式表面染色方法标記CD4/B220/CD25。4°C避光(guāng)孵育30min，加入1ml 紅細胞裂解液，室溫避光(guāng)裂解10min。1000r/min離心5min後棄上清，緩沖液洗滌一次，離心完全棄上清。分(fēn)别使用(yòng)Foxp3 Fixation/permeabilization buffer，permeabilization buffer 處理(lǐ)細胞，按照(zhào)流式表面染色方法标記FOXP3，室溫避光(guāng)孵育20min。1000r/min離心5min後棄上清，緩沖液洗滌1次後加入300ulPBS，4°C保存待檢。用(yòng)流式細胞儀檢測B細胞、Treg細胞(CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺)比例。

3.6 胸腺淋巴細胞分(fēn)型測定    制備胸腺細胞懸液，調整細胞濃度爲10^7 /ml，取100ul 細胞懸液加到EP管中。按照(zhào)流式表面染色方法标記CD4/ CD8。4°C避光(guāng)孵育30min，1000r/min離心5min後棄上清，緩沖液洗滌1次後加入300ulPBS，4°C保存待檢。用(yòng)流式細胞儀檢測CD4⁺T細胞、CD8⁺T細胞、CD4⁺CD8⁺T細胞比例。

3.7 統計學方法    采用(yòng)Prism5軟件處理(lǐ)數據、作圖。各指标間兩組實驗數據的(de)比較采用(yòng)t檢驗，數據以均數±标準差（`X±s）表示。

三、評價與驗證

1 環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠白細胞及分(fēn)類的(de)影(yǐng)響

爲研究不同年齡小鼠免疫損傷的(de)發生和(hé)恢複的(de)差異，我們首先比較了(le)環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠白細胞數（10⁹/L）、中性粒細胞比例、淋巴細胞比例的(de)影(yǐng)響。未給藥時(shí)，幼年鼠白細胞數、中性粒細胞比例、淋巴細胞比例與成年鼠相近；老年鼠白細胞數、中性粒細胞比例顯著高(gāo)于成年鼠，淋巴細胞比例顯著低于成年鼠。 

給藥後，對(duì)比WBC結果發現，成年鼠白細胞數在第3天降到52%（爲了(le)更好地反映不同年齡小鼠損傷及恢複的(de)規律，設各年齡小鼠空白對(duì)照(zhào)數據爲100%，以給藥組測定值/空白對(duì)照(zhào)組測定值×100%作圖，下(xià)同），至第7天即可(kě)恢複正常水(shuǐ)平。幼年鼠變化(huà)趨勢與成年鼠相似。老年鼠白細胞數在第3天降到27%，下(xià)降幅度遠(yuǎn)大(dà)于成年鼠，且4周後隻能恢複至42%。

對(duì)比中性粒細胞比例發現，成年鼠中性粒細胞比例在第7天升高(gāo)到130%，2周後可(kě)恢複至正常水(shuǐ)平。幼年鼠中性粒細胞比例在第7天升高(gāo)到221%，升高(gāo)幅度大(dà)于成年鼠，2周後亦可(kě)恢複至正常水(shuǐ)平。老年鼠中性粒細胞比例在第7天下(xià)降到59%，趨勢與成年鼠相反，4周後未能恢複到正常水(shuǐ)平。

對(duì)比淋巴細胞比例發現，成年鼠淋巴細胞比例在第7天小幅下(xià)降，下(xià)降到85%，2周後可(kě)恢複到正常水(shuǐ)平。幼年鼠變化(huà)趨勢與成年鼠相似。老年鼠淋巴細胞比例在給藥後第3天即上升到119%，至第7天基本維持該水(shuǐ)平，2周後可(kě)恢複到正常水(shuǐ)平。

2 環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠器官指數的(de)影(yǐng)響

在分(fēn)析白細胞及分(fēn)類的(de)基礎上，我們進一步觀察了(le)環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠免疫器官指數的(de)影(yǐng)響。未給藥時(shí)，幼年鼠胸腺指數顯著高(gāo)于成年鼠；脾髒指數與成年鼠無明(míng)顯差異。老年鼠胸腺指數顯著低于成年鼠；脾髒指數與成年鼠無明(míng)顯差異。

對(duì)比胸腺指數發現：成年鼠胸腺指數在給藥後第3天下(xià)降至58%，至第28天，隻能恢複至77%。幼年鼠損傷及恢複情況與成年鼠相似。老年鼠胸腺指數在給藥後第3天未有明(míng)顯變化(huà)，第7天下(xià)降至55%，降至最低值時(shí)間晚于成年鼠，第14天後可(kě)恢複至正常值。

對(duì)比脾髒指數發現：成年鼠脾髒指數在第3天下(xià)降至73%，第7天略有升高(gāo)，第14天後可(kě)恢複至正常值。幼年鼠在第7天下(xià)降至68%，降至最低值時(shí)間晚于成年鼠，恢複情況與成年鼠相似。老年鼠在第3天下(xià)降至40%，下(xià)降程度高(gāo)于成年鼠，至第7天，基本維持損傷水(shuǐ)平，恢複情況與成年鼠相似。

3 環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠胸腺淋巴細胞分(fēn)型的(de)影(yǐng)響

在分(fēn)析免疫器官指數的(de)基礎上，我們進一步觀察了(le)環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠胸腺淋巴細胞分(fēn)型的(de)影(yǐng)響。未給藥時(shí)，幼年鼠CD4⁺T細胞、CD8⁺T細胞、CD4⁺CD8⁺T細胞比例均與成年鼠接近。老年鼠CD4⁺T細胞、CD8⁺T細胞、CD4⁺CD8⁺T細胞比例均顯著低于成年鼠。

給藥後，對(duì)比CD4⁺T細胞比例發現：成年鼠在給藥3天後顯著降低至36%，7天後可(kě)恢複至正常值，但是4周後再次下(xià)跌至26%。幼年鼠在給藥3天後，CD4⁺T細胞比例小幅下(xià)降至89%，7天後即可(kě)恢複至正常值，變化(huà)趨勢與成年鼠不同。老年鼠損傷、恢複情況與成年鼠類似。

對(duì)比CD8⁺T細胞比例發現：成年鼠在給藥3天後，CD8⁺T細胞比例顯著下(xià)降至35%，7天後可(kě)恢複至正常值，但4周後再次下(xià)跌至13%。幼年鼠在給藥3天後，CD8⁺T細胞比例下(xià)降至71%，7天後即可(kě)恢複至正常值範圍，變化(huà)趨勢與成年鼠不同。老年鼠損傷、恢複情況與成年鼠類似。                

對(duì)比CD4⁺CD8⁺T細胞比例發現：成年鼠在給藥3天後，CD4⁺CD8⁺T細胞比例顯著下(xià)降至18%，7天後可(kě)恢複至正常值，但4周後再次下(xià)降至3%。幼年鼠在給藥3天後，CD4⁺CD8⁺T細胞比例下(xià)降至63%，第7天可(kě)恢複至正常值範圍，至第28天，再次下(xià)降至77%，變化(huà)趨勢與成年鼠不同。老年鼠損傷、恢複情況與成年鼠類似。

4 環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠脾髒淋巴細胞分(fēn)型的(de)影(yǐng)響

調節性T（Treg）細胞在調控T細胞的(de)發育和(hé)功能中起重要作用(yòng)。在分(fēn)析胸腺細胞分(fēn)型的(de)基礎上，我們進一步觀察了(le)環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠脾髒細胞分(fēn)型的(de)影(yǐng)響。未給藥時(shí)，幼年鼠B細胞比例顯著低于成年鼠；Treg細胞顯著高(gāo)于成年鼠。老年鼠B細胞、Treg細胞比例均顯著低于成年鼠。

給藥後，對(duì)比B細胞比例：成年鼠在給藥後，B細胞比例持續走低，第14天達最低值43%，4周後可(kě)恢複至86%。幼年鼠、老年鼠在給藥後，B細胞比例無明(míng)顯變化(huà)，均與成年鼠變化(huà)趨勢不同，見圖4-A。

對(duì)比Treg細胞比例發現：成年鼠在給藥3天後，Treg細胞比例下(xià)降至59%，至第7天下(xià)降至最低值4%，4周後可(kě)恢複至126%。幼年鼠損傷情況與成年鼠類似，但4周後僅能恢複至66%。老年鼠損傷、恢複情況與成年鼠類似。

5 環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠外周血淋巴細胞分(fēn)型的(de)影(yǐng)響

在分(fēn)析脾髒細胞分(fēn)型的(de)基礎上，我們進一步觀察了(le)環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠外周血淋巴細胞分(fēn)型的(de)影(yǐng)響。未給藥時(shí)，幼年鼠NK細胞與成年鼠比例相近；B細胞、巨噬細胞随著(zhe)年齡的(de)增長(cháng)，至第28天與成年鼠比例相近；CD4⁺T細胞、CD8⁺T細胞存在反跳後回落現象，至第28天與成年鼠比例相近。老年鼠巨噬細胞、CD8⁺T細胞與成年鼠比例相近；NK細胞比例高(gāo)于成年鼠；CD4⁺T細胞比例低于成年鼠。

給藥後，對(duì)比NK細胞比例發現：成年鼠在給藥7天後NK細胞比例下(xià)降至 29%，至第28天，經過小幅反跳後恢複至106%。幼年鼠在給藥後第3天，NK細胞比例無明(míng)顯變化(huà)，至第7天，上升至149%，至第28天依然維持該水(shuǐ)平，變化(huà)趨勢與成年鼠不同。老年鼠在給藥3天後，NK細胞比例下(xià)降至53%，至第28天，依然維持該水(shuǐ)平，變化(huà)趨勢與成年鼠不同。

對(duì)比B細胞絕對(duì)數發現：成年鼠在給藥後第3天，B細胞比例驟降至2%，至第7天，可(kě)恢複至45%，第14天反跳至122%，4周後回落到57%。幼年鼠損傷及恢複趨勢與成年鼠類似，恢複情況優于成年鼠。老年鼠在給藥後第3天，B細胞比例驟降至1%，至第7天，可(kě)恢複至25%，至第28天，一直維持該水(shuǐ)平，恢複趨勢與成年鼠不同，且恢複能力弱于成年鼠。

對(duì)比巨噬細胞比例發現：成年鼠在給藥3天後，巨噬細胞比例驟降至20%，至第7天反跳至192%，至第28天可(kě)恢複至正常值。幼年鼠變化(huà)趨勢與成年鼠類似。老年鼠：在給藥後第3天，巨噬細胞比例驟降至14%，至第7天回升到144%，至第28天回落到56%，變化(huà)趨勢與成年鼠不同。

對(duì)比CD4⁺T細胞絕對(duì)數發現：成年鼠在給藥3天後，CD4⁺T細胞比例驟降至4%，至第7天即可(kě)恢複正常值範圍。幼年鼠在給藥3天後，CD4⁺T細胞比例下(xià)降至30%，至第7天僅能恢複至47%，第14天可(kě)恢複正常值範圍，恢複能力弱于成年鼠。老年鼠在給藥3天後，CD4⁺T細胞比例驟降至1%，7天後僅能恢複至58%，第14天小幅回升，至第28天跌至63%，恢複情況弱于成年鼠。

對(duì)比CD8⁺T細胞絕對(duì)數發現：成年鼠在給藥3天後，CD8⁺T細胞比例驟降至3%，至第7天，可(kě)恢複至70%，第14天時(shí)小幅回升，至第28天可(kě)恢複至正常值。幼年鼠在給藥後第3天，CD8⁺T細胞比例下(xià)降至20%，7天可(kě)恢複至39%，2周時(shí)可(kě)恢複至122%，恢複能力弱于成年鼠。老年鼠在給藥後第3天，CD8⁺T細胞比例驟降至3%，至第7天可(kě)恢複至83%，此後仍維持該水(shuǐ)平，恢複情況弱于成年鼠。

6 環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠血漿IgA、IgG、IgM含量的(de)影(yǐng)響

在分(fēn)析外周血淋巴細胞分(fēn)型的(de)基礎上，我們進一步觀察了(le)環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠血漿IgA、IgG、IgM的(de)影(yǐng)響。未給藥時(shí)，幼年鼠IgA、IgM含量與成年鼠相近，IgG含量顯著高(gāo)于成年鼠。老年鼠IgA、IgG、IgM含量均顯著高(gāo)于成年鼠，給藥後，對(duì)比血漿IgA含量發現：成年鼠在給藥後第3天，IgA含量下(xià)降至7%，至第2周，依然維持在較低水(shuǐ)平，至第4周可(kě)恢複至83%。幼年鼠在給藥後第3天，IgA含量下(xià)降至62%且至第4周可(kě)完全恢複。損傷恢複情況優于成年鼠。老年鼠變化(huà)趨勢與成年鼠基本一緻。

對(duì)比血漿IgG含量發現：成年鼠在給藥後第3天，IgG含量驟降至5%，至第7天，依然維持較低水(shuǐ)平且4周隻能恢複至原來(lái)的(de)50%。幼年鼠在給藥後第7天，IgG含量下(xià)降至38%，至第2周即可(kě)完全恢複。老年鼠損傷情況與幼年鼠相似，但恢複緩慢(màn)，至第4周隻能恢複至75%。

對(duì)比血漿IgM含量發現：成年鼠在給藥後第3天，IgG含量降至37%，至第4周可(kě)完全恢複。幼年鼠、老年鼠變化(huà)情況與成年鼠基本一緻。

四、生物(wù)安全性

在制備模型使用(yòng)環磷酰胺，應注意戴手套和(hé)口罩。剩餘藥品及污染器械要注意安全處理(lǐ)。

五、討(tǎo)論和(hé)結論

6歲以下(xià)的(de)兒(ér)童處于“免疫功能不全期”，自身免疫系統發育還(hái)未成熟，免疫系統較易受到攻擊。在一些疾病的(de)急性期，兒(ér)童常發生免疫細胞紊亂，而引起繼發感染。有研究表明(míng)，到2025年，中國将進入重度老齡化(huà)社會。随著(zhe)年齡的(de)增長(cháng)，人(rén)體免疫系統功能将逐漸衰退。免疫功能不足對(duì)老年人(rén)的(de)健康産生極爲不利的(de)影(yǐng)響。目前，許多(duō)老年病需要長(cháng)期用(yòng)藥，部分(fēn)藥物(wù)會産生免疫系統損傷的(de)毒副作用(yòng)，老年人(rén)在應用(yòng)這(zhè)類藥物(wù)後，相較成年人(rén)，對(duì)損傷會更敏感且恢複更緩慢(màn)。

本實驗以環磷酰胺爲陽性藥物(wù)，可(kě)爲日後評價對(duì)兒(ér)童、老人(rén)免疫系統有損傷作用(yòng)的(de)藥物(wù)提供基礎數據。我們亦對(duì)比了(le)幼年、成年、老年鼠外周血、胸腺、脾髒免疫細胞的(de)相關參數以及應用(yòng)免疫抑制劑造模後的(de)參數變化(huà)，爲兒(ér)童、老人(rén)應用(yòng)對(duì)免疫系統有調節作用(yòng)的(de)藥物(wù)時(shí)提供參考。

六、鑒定和(hé)評論的(de)其他(tā)材料

1. 林(lín)帥，陳孟毅，劉冰，李程程，李德冠，吳麗賢，孟愛(ài)民. 環磷酰胺對(duì)不同年齡小鼠免疫細胞損傷及修複作用(yòng)的(de)影(yǐng)響. 中國醫藥導報，2016，13（36）：8-13,35

2. 陳孟毅, 林(lín)帥, 吳麗賢, 劉冰, 李程程, 李德冠*, 孟愛(ài)民*. 不同年齡小鼠造血系統輻射損傷與修複的(de)比較觀察 [J] .國際放射醫學核醫學雜(zá)志,2019,43( 5 ): 442-449.